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收藏！活性氧(ROS)检测的实战攻略和文献解读

ROS水平一旦超过内源性抗氧化防御的能力，氧化还原平衡被破坏，就会导致DNA、脂质、蛋白质的结构或构像改变，最终导致细胞死亡。

 

ROS水平是细胞正常生理功能和环境因素导致细胞损伤的重要信号，检测细胞内ROS水平对于理解一些药物作用的信号通路和潜在作用机制具有重要意义。因此选择合适的探针检测ROS对于疾病机理研究以及药物筛选具有重要作用。
 
 
产品检测原理
 
CellROX Orange Reagent，一种用于检测活细胞内氧化应激的新型荧光探针，该探针可穿透活细胞膜，在还原态时无荧光，一旦进入细胞，被细胞内的活性氧(ROS)氧化后即可发出明亮橙黄色荧光，其最大吸收/发射波长分别为545/565 nm。

 

 
 
产品应用
 

  • 氧化应激检测

  • 活性氧（ROS）检测

  • 活细胞检测

 

 

客户使用本产品发表的科研文献
 

 

文献一

 
客户发表文献的截图[1]
 

 

实验步骤：将HK2细胞以每孔5*103个细胞的数量接种到96孔板中，在37℃、5% CO2下培养24 h。然后用PDA-CNDs预处理6 h，无PDA-CNDs在37℃、5% CO2下缺氧1 h、常氧24 h或H2O2(900 μM)孵育24 h。最后用MTT法检测细胞活力。经过PDA-CNDs预处理6小时和H2O2在37℃、5% CO2下孵育3小时后，用CellROX Orange Reagent, for Live Cell Oxidative Stress Detection 氧化应激检测橙色探针（活细胞）（50103ES）检测活细胞中ROS水平。每个孔中加入荧光探针，终浓度为5 μM, 37℃孵育30 min。然后取出培养基，PBS洗涤3次。荧光显微镜下观察荧光，激发545 nm，发射565 nm。[1]
 
客户使用本产品的截图[1]
 
 
e. H2O2 (900 μM)对HK2细胞有代表性的细胞内ROS染色（PDA-CNDs未处理组和处理组）
f. H2O2 (900 μM)处理HK2细胞内ROS水平（PDA-CNDs未处理组和处理组）[1]
 
 

文献二

 
客户发表文献的截图[2]
 

 

ROS产生和线粒体膜电位的检测

 

实验步骤：为了检测ROS的产生，实验前1天在每个孔（12孔板）中播种1*105个细胞。用0.8 mM H2O2分别处理细胞0、2、4和8 h。将处理后的细胞，用胰蛋白酶消化成单细胞，重悬于500 μL PBS中。样本中分别加入25 μM H2DCFDA、2 μM C11-BODIPY581/591和5 μM MitoSOX。为了检测线粒体膜电位(MMP)和细胞质ROS，用0.8 mM H2O2处理细胞4 h，胰蛋白酶消化成单细胞，然后重悬，分别用2 μg/ml Rhodamine 123和5 μM CellROX Orange Reagent (Yeasen, 50103ES50)处理，37℃孵育20 min后，将细胞离心、重悬并使用流式细胞仪进行检测分析，使用FlowJosoftware分析所有荧光激活细胞分选数据。[2]
 
 
客户使用本产品的截图[2]
 
流式细胞术分析Slc25a43-KO ESCs和WT-diESCs中线粒体ROS水平(0.8 mM H2O2处理0、2、4和6 h) [2]
 
 
通过流式细胞仪分析和C11-BODIPY染色评估Nlrx1-OE ESCs、空载体转染ESCs和WT-diESCs在有或没有RSL3 (1 μM)的情况下用0.8 mM H2O2处理4 h后脂质ROS的产生情况[2]
 
 
FAQ
 
1. 这个荧光探针能用甲醛固定吗？
本试剂与甲醛固定不兼容，但它可以与其他活细胞兼容的探针联用。
 
2. 这个细胞膜染料是否适用于植物细胞以及去除细胞壁的原生质体？
不推荐对植物细胞染色。若想做的话，可以参考文献制备原生质体进行染色。
 
3. 这个荧光探针用什么仪器检测？
适用于流式细胞仪和传统的荧光显微镜检查，或者高内涵筛选检测，流式通道是最好561激发，如果没有，488激发检测PE，效果可能会弱一点。
 
4. 可以和哪些探针联用？
可以和多种染料联用，比如GFP、CellEvent® Caspase 3/7 Green reagent, Image-iT® DEAD Green, Green and Deep Red MitoTracker® dyes, and NucBlue™ reagent等试剂联用，用于多色标记实验。
 
5. 发出的荧光是什么颜色？
经活性氧簇 (ROS) 氧化后发出明亮的橙色荧光。
 
6. 用活性氧（ROS）指示染料标记细胞，但没有观察到显著的信号差异，为什么？

  • 首先，确保有一个阳性（ROS诱导）和一个阴性（未处理）样本进行对照。甲萘醌(100 µM, 1 h)或是奈法唑酮(50 µM, 24 h)可作为阳性对照。H2O2虽然不能很好地与CellROX染料兼容，但也可以用于阳性对照。

  • 尝试着增加染料浓度和标记时间。

  • 尽快完成活细胞成像实验。

  • 确保使用的滤光片和仪器设置与染料的激发和发射光谱相匹配。

  • 某些情况不能存在血清。如H2DCFDA染料需要酯酶切割，血清中包含的酯酶会提前切割染料。

 
7. 可以用来检测细菌内的活性氧(ROS)吗？
许多对哺乳动物细胞使用的染料也可以用于细菌。具体可参考相关文献。
 

 

产品推荐
 
 

名称

产品货号

规格

目录价

促销价

CellROX Orange Reagent, for Live Cell Oxidative Stress Detection 氧化应激检测橙色探针（活细胞）

50103ES50

1×50 μL

2,253

2,038

 

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